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BandScan是一个很常用的凝胶图像分析软件,我们用它重要是为了分析蛋白表达量。现在,我就以我自己表达的一个蛋白图,来示范这个软件分析的过程。最后结果是得到目的蛋白占总蛋白的百分数。
1.安装软件BandScan5.0。主程序可以在网上找到(请搜索以往的帖子或用google搜索BandScan_dl.exe)。安装以后加个补丁(如果找不到补丁可以email我zhuzhang@sohu.com,这有4.3、4.5和5.0的补丁,请尽量自己先找一下)。
2.安装好以后就会在桌面上出现BandScan的图标。双击打开。
3.打开后的界面如图。
打开一张扫描好的电泳图。BandScan可以识别TIF和JPG格式的图片,很方便。打开工具栏上的file/open tiff,jpg file format,选中待分析的图片。
5.打开。这时候凝胶图像显示出来。1道是低分子量标准,2道是诱导表达的蛋白,3道是未诱导的对照。旁边有一个图像预览窗口Image Preview,可以看到,除了cancal,其它命令框都是灰色的(不可操作)。其实这里是要你先选定一个图像处理的范围(select rectangle)。
6.从凝胶图左上角按住鼠标左键划到右下角,松开鼠标,划出的长方形框包扩了整个待分析的范围。这时,命令框内均变成黑色的(可以操作)。上面那个undo rect可以取消选框,下面的image options可以选择是否和如何旋转图像。本例中均不改动,直接单击accept selected region。
7.出现color to signal selections复选框。这个是选择信号检测方式,直接用默认的original image,或选择gray scale(灰阶)。本例中不改动,单击use current image。
8.出现如下分析框。它是自动转换成灰阶的。其左上角的数字是鼠标所在的坐标和灰度值。移动鼠标就可以看到它的变化。
9.现在让BandScan来分析一下电泳条带吧:)打开工具栏上的bandfinding/findbands,出现一个让你选择有几条泳道的框selecting number of lanes,我们设置成3道。
11.现在就可以看看蛋白的表达量了。打开window/bandtable。出现了一个bandlocation的表格。把它最大化,放到右边。这里的数据是每个条带的中心位置(红色+的位置)。
12.在band location的数据类型data type中,选择percent signal,就会出现各个条带灰度值占本泳道条带总灰度值的百分比。
13.单击自己的表达条带,则条带中心的+和相应的百分数的背景都会变成绿色。我表达的融合蛋白约占细菌总蛋白的29.8%。我们要的数据就得到了。自己再重复一下整个过程,会发现,原来是如此简单。
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